柯文哲上午受到天氣濕冷因素影響，延路行程都略受延誤，下午隨著中南部地區雨勢已停、地面乾燥，他加緊腳步繼續南下，歷經近11個小時，於下午4時22分進入雲林，一行人騎車跨越濁水溪。
傍晚5時46分抵達雲林口湖龍台宮、完成280公里，柯文哲在此短暫休息，雲林縣長李進勇也來探視，兩人一同拜拜祈福，柯隨後於5時58分出發，較預定延遲20分鐘。
柯文哲緊接著於晚間6時30分左右進入嘉義東石，即便夜幕低垂，他仍奮勇力向前騎，之後到嘉義布袋的全家便利商店上廁所，受到民眾熱烈歡迎及拍照，稍晚於晚間7時41分離開，繼續行程，延遲58分鐘。
抵達台南七股時已經是晚間8時33分、完成329公里，柯文哲一行人在此也開始較長時間的休息，以補充體力，原本預計休息2小時，後來縮短為約70分鐘左右，進行暖身後，於晚間11時45分從台南再出發南下，繼續前進。
「一日雙塔」28日行程，還包括凌晨零時30分預計抵達高雄永安萊爾富永新門市，也是上次北高挑戰的里程碑，具特殊意義；凌晨3時30分預計到屏東縣大鵬灣7-11門市進行休息補給。
另外，28日上午6時5分到達屏東縣竹坑派出所；緊接著於7時25分到屏東縣後壁湖7-11門市；最後於8時20分到達「一日雙塔」終點站「鵝鑾鼻燈塔」。
柯文哲27日清晨近5時30分從富貴角燈塔出發，挑戰騎自行車在24小時內長征520公里，目標預定28日凌晨騎到台灣南端的屏東鵝鑾鼻燈塔，之後再搭乘高鐵返回台北參加市政行程，包括自行車嘉年華活動及視察社子島i-voting投票。